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蛋白質譜檢測

 

蛋白質是生物體中至關重要的分子，其結構和功能對于生命活動具有重要影響。蛋白質譜檢測作為一種先進的分析技術，為我們提供了深入了解蛋白質的工具。它不僅可以幫助我們鑒定和定量蛋白質樣品，還可以揭示蛋白質的結構、修飾和相互作用等信息，常見的質譜儀器主要有質譜質量分析儀（MS）和液相色譜（LC）等儀器，用于離子化、分離和檢測蛋白質樣品。

蛋白質質譜鑒定方法通常使用串聯質譜（MS/MS）和液相色譜-質譜聯用（LC-MS/MS）等方法，其中，簡單蛋白樣本用MS/MS，混合復雜蛋白樣本用LC-MS/MS。兩種方法作用原理相似：先將蛋白質利用蛋白酶消化成肽段，肽段在質譜儀中會離子化帶上一定量的電荷，離子檢測器可以鑒定各肽段的質荷比，從而獲知各肽段的相對分子質量；質譜儀會繼續打斷某些肽段再次分析，生成二級質譜，從而獲得肽段的序列信息；通過質譜數據庫比對分析，即可鑒定蛋白質。

蛋白質譜檢測主要有一下幾種應用，生物制品開發：蛋白質譜檢測在生物制品的研發過程中起著重要作用，可以幫助鑒定和驗證蛋白質產品的純度、結構和功能；生物標志物鑒定：通過蛋白質譜檢測，可以發現與特定疾病相關的生物標志物，為早期診斷和治療提供依據；藥物代謝研究：蛋白質譜檢測可用于研究藥物在體內的代謝過程，揭示藥物的藥代動力學和藥效學特征。

根據質譜檢測原理，我們可以知道蛋白樣本制備的過程至關重要，這決定了最終質譜結果的好與壞，而蛋白樣本制備的關鍵就在于蛋白內切酶的選擇了。

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產 品 推 薦

 

本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶，該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽，可用于蛋白測序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶，可更好地切斷賴氨酸基團的多肽，增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個樣品的凝膠內消化。

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應 用 實 例

 

分別采用胰蛋白酶（Tp）、賴氨酰肽鏈內切酶（Lys-C）和Tp與Lys-C 聯用進行膠內酶切的效果比較。

牛血清蛋白BSA的條帶（100 ng）通過SDS-PAGE獲得，然后分別用Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp進行酶切，再用MALDI-TOFMS法進行分析。這些蛋白酶的實驗效果見下表，這些結果表明Lys-C酶解的漏切位點數（Missed Cleavage）最少。Tp酶解時加入Lys-C后，漏切位點數有所降低，同時，可以鑒定出更多的多肽。

表1：Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp的結果對照

胰蛋白酶（Tp）（圖 ａ）和賴氨酰肽鏈內切酶（Lys-C）+Tp（ 圖 ｂ）

酶切后的質譜結果對照圖。

Lys-C+Tp酶切后，可以在m/z=2000時得到吸收峰，而單獨的Tp酶切在m/z=2000時沒有吸收峰。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。

產品數據來源富士膠片和光(廣州)貿易有限公司 

http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/pdf/show/152.html