超濾是大分子脫鹽、濃縮最方便的方法,重復(fù)性好,已經(jīng)在蛋白、抗體、病毒、外泌體、核酸、囊泡等樣品制備中建立標(biāo)準(zhǔn)操作。
默克生命科學(xué)旗下品牌Millipore的Amicon Ultra超濾管采用離心方式快速處理樣品,是很多科研小伙伴們每天要用到的基本裝備。但是,在默克生命科學(xué)團(tuán)隊(duì)推出超濾管中文說明書(0.5、4、15)之前,我們發(fā)現(xiàn)近90%的使用者在選擇和使用過程中因?yàn)槿狈Ρ匾畔⒍鴽]有獲得最佳體驗(yàn),更重要的是,寶貴的樣本會遭受本可避免的損失!
· 選對截留分子量,事半功倍
如果目的蛋白是120kDa,請問應(yīng)該選擇的超濾管規(guī)格是100k、50k,還是30k甚至10k?你采用1/2、1/3抑或1/6算法?這些沒有統(tǒng)一的說法,是因?yàn)椴煌瑥S家對膜的截留分子量的定義不同。Millipore超濾管采用其特有的再生纖維素膜,定義為:一個(gè)確定NMWL 的超濾膜應(yīng)該截留至少90% 以上的這個(gè)大小的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel再生纖維素膜得率超過90%。請仔細(xì)查看以下Millipore官方數(shù)據(jù):
截留分子量選小啦!看到這個(gè)表,你是否發(fā)現(xiàn)原來抱怨Millipore超濾管流速偏慢的根源來自對Millipore截留分子量定義的誤解?膜孔徑要小于目的分子。因?yàn)闃悠贩肿有螤畈煌瑸榱俗畲蠡瘶悠返幕厥眨瑢τ跊]有參考的樣品,可以初步選擇截留分子量約為目的分子分子量1/2的膜。
· 倒轉(zhuǎn)離心,最大化回收率
收取體積已經(jīng)很小的濃縮好的樣品時(shí),你會:
⊙ 購買最尖細(xì)的槍頭,把樣品吸回來
⊙ 濃縮倍數(shù)低一點(diǎn),以便用槍頭把樣品吸回來
⊙ 反轉(zhuǎn)離心回收,獲得最高得率
最后一個(gè),你答對了么?
Millipore Amicon Ultra系列超濾管上樣體積有0.5/2/4/15/70mL等五種,除了采用低吸附的管材和最低蛋白吸附的再生纖維素超濾膜,其中0.5mL、2mL和70mL的規(guī)格還特別設(shè)計(jì)了反轉(zhuǎn)回收模式,以便使已經(jīng)濃縮的樣品最大化回收。現(xiàn)在你總該知道為什么收到產(chǎn)品時(shí)會有兩個(gè)外管了吧~
· 脫鹽濃縮,一個(gè)超濾管搞定
濃縮用超濾管,脫鹽用透析袋或脫鹽柱,這是很多實(shí)驗(yàn)室一直沿用的實(shí)驗(yàn)操作。其實(shí)呢,超濾管做“脫鹽+濃縮”,也是很多蛋白操作高手的小訣竅。Millipore中文官方說明書特別給大家提示了這個(gè)方法——用更少的工具和更短的時(shí)間,減少轉(zhuǎn)移誤操作和樣品損失,卻能獲得更好處理效果,你get了嗎?
實(shí)驗(yàn)材料 |
貨號 |
規(guī)格 |
Amicon Ultra-2, Ultracel-3 Membrane, 3 Kda; 24/Pk |
UFC200324 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-10 Membrane, 10 Kda; 24/Pk |
UFC201024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-30 Membrane, 30 Kda; 24/Pk |
UFC203024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-30 Membrane, 30 Kda; 24/Pk |
UFC203024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-50 Membrane, 50 Kda; 24/Pk |
UFC205024 |
24/PK |
Amicon Ultra-2, Ultracel-100 Membrane, 100 Kda; 24/Pk |
UFC210024 |
24/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 3K 96Pk |
UFC500396 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 3K 500Pk |
UFC5003BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 10K 96Pk |
UFC501096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 10K 500Pk |
UFC5010BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 30K 96Pk |
UFC503096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 30K 500Pk |
UFC5030BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 50K 96Pk |
UFC505096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 50K 500Pk |
UFC5050BK |
500/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 100K 96Pk |
UFC510096 |
96/PK |
Amicon Ultra 0.5Ml 100K 500Pk |
UFC5100BK |
500/PK |
Amicon Ultra-4 4Ml 3K Nmwl 96Pk |
UFC800396 |
96/PK |
Amicon Ultra Centrifugal 4Ml 10K Nmwl 96Pk |
UFC801096 |
96/PK |
Amicon Ultra Centrifugal 4Ml 30K Nmwl 96Pk |
UFC803096 |
96/PK |
Amicon Ultra-4 50K Nmwl 96Pk |
UFC805096 |
96/PK |
Amicon Ultra Centrifugal 4Ml 100K Nmwl 96Pk |
UFC810096 |
96/PK |
Amicon Ultra 15Ml 3K Nmwl 96Pk |
UFC900396 |
96/PK |
Amicon Ultra 15ml 10K 96pk |
UFC901096 |
96/PK |
Amicon Ultra 15ml 30K 96pk |
UFC903096 |
96/pk |
Amicon Ultra 15Ml 50K 96Pk |
UFC905096 |
96/pk |
Amicon Ultra 15Ml 100K 96Pk |
UFC910096 |
96/pk |
Centicon plus -70 5K 8PK |
UFC700508 |
8/pk |
Centicon plus -70 10K 8PK |
UFC701008 |
8/pk |
Centicon plus -70 50K 8PK |
UFC705008 |
8/pk |
Centicon plus -70 100K 8PK |
UFC710008 |
8/pk |