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常用的免疫組化染色方法很多，有直接法和間接法。直接法是將酶或熒光素等標(biāo)記在第一抗體上，然后用該被標(biāo)記的第一抗體與組織細(xì)胞中的抗原結(jié)合，即可以顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果；

間接法是將標(biāo)記物標(biāo)記在第二抗體或第三抗體（復(fù)合物）上，其方法是先將特異性的第一抗體與組織細(xì)胞中相應(yīng)的抗原結(jié)合，再將被標(biāo)記上標(biāo)記物的第二抗體與第一抗體結(jié)合，最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。如果標(biāo)記物是標(biāo)記在第三抗體（復(fù)合物）上，則第二抗體與第一抗體結(jié)合后，再用被標(biāo)記上標(biāo)記物的第三抗體（復(fù)合物）與第二抗體結(jié)合，最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。

常用的EPOS一步法屬于直接法，EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法、SABC法、和CSA法等屬于間接法。相對(duì)來(lái)說(shuō)直接法特異性高，敏感性低，而間接法則敏感性高，特異性低。

抗生物素蛋白鏈菌素-生物素復(fù)合物（streptavidin biotincomplex，SABC）法方法和ABC法相類(lèi)似，不同之處是SABC法用抗生物素蛋白鏈菌素代替了ABC法ABC復(fù)合物中的卵白素獲得SABC復(fù)合物。由于抗生物素蛋白鏈菌素與生物素的親和力更高，而且SABC復(fù)合物不需在使用前配制，所以SABC法比ABC法更加敏感和簡(jiǎn)單。

 

 

 

 

酶標(biāo)聚合物法（labelled dextran polymer，LDP）法應(yīng)用了酶標(biāo)聚合物技術(shù)，如EnVision檢測(cè)系統(tǒng)，首先將辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記在葡聚糖聚合物上，然后再與第二抗體連接而形成EnVision二抗。

LDP法屬于二步法，特異性一抗和組織細(xì)胞抗原結(jié)合后，再用EnVision二抗與抗原抗體復(fù)合物中的一抗結(jié)合，最后通過(guò)EnVision二抗上的酶參與顯色反應(yīng)。

由于EnVision二抗中的聚合物結(jié)構(gòu)的獨(dú)特，可以連接更多的二抗，使每個(gè)多聚物有超過(guò)20個(gè)位點(diǎn)與第一抗體結(jié)合，聚合物上能標(biāo)記上的酶數(shù)量較多。因此在顯色時(shí)有充足的酶與顯色劑起反應(yīng)。

因此LDP法的敏感性高于ABC、LSAB等方法。此外，LDP法中的第二抗體沒(méi)有生物素的存在，不會(huì)出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應(yīng)的現(xiàn)象，因此LDP法的非特異性背景染色極低。

 

 

 

 

增強(qiáng)聚合物一步法（enhanced polymer one setp，EPOS）法也屬于酶標(biāo)聚合物法，和LDP法一樣，是利用酶標(biāo)聚合物技術(shù)，將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記在葡聚糖聚合物上，然后再與第一抗體連接而形成EPOS一抗。

EPOS法屬于直接法，直接用EPOS一抗特異性和組織細(xì)胞抗原結(jié)合后，一抗上的酶參與顯色反應(yīng)。由于EPOS一抗中的聚合物上能標(biāo)記上的酶數(shù)量較多，在顯色時(shí)有充足的酶與顯色劑起反應(yīng)。因此EPOS法雖然是直接法，但具有高敏感性。

此外，EPOS一抗沒(méi)有生物素的存在，不會(huì)出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應(yīng)的現(xiàn)象，背景清晰。但EPOS一抗種類(lèi)較少，難以普及。

 

 

 

 

 

催化信號(hào)放大（catlyzed signal amplification，CSA）法是應(yīng)用一種放大試劑生物素化酪胺，與抗生物素蛋白鏈菌素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（streptavidin biotin-HRP）連接，在過(guò)氧化物酶作用下形成大量的生物素沉積物，再加入抗生物素蛋白鏈菌素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物后，過(guò)氧化物酶與生物素沉積物形成大量的過(guò)氧化物酶聚合，聚合的過(guò)氧化物酶與顯色劑起反應(yīng)。在第三步應(yīng)用了SABC法的SABC-HRP復(fù)合物，第五步應(yīng)用了LSAB法的SA-HRP復(fù)合物。

 

由于CSA法加入了催化信號(hào)放大試劑，使信號(hào)不斷放大，因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法和SABC等方法高。特別適用于檢測(cè)較弱的組織抗原。

 

 

 

 

 

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